Klorofyll är ett grönt pigment som finns i högre växter och alla andra fotosyntetiska organismer. Klorofyll A och klorofyll B är lösliga i etanol, eter och aceton och andra lösningsmedel, olösliga i vatten och petroleumeter, kan därför använda polära lösningsmedel som aceton, metanol, etanol, etylacetat och så vidare för att extrahera klorofyll.
Klorofyllextraktionsprocess:
Klorofyllextraktion förbereds i ett halvmörkt rum vid 25 grader C. Extraktionsstegen är följande:
(1) Ta 1000 gram färska gröna blad och krossa dem i en Wechsler.
(2) Lägg de krossade 1000 gram gröna blad i aceton med en liten mängd kalciumkarbonat (temperatur 20 grader) för extraktion, tills bladfragmenten är färglösa efter filtrering och rengöring.
(3) Häll det filtrerade acetonextraktet i en tratt innehållande 1 liter petroleumeter och 100 ml aceton och rotera sedan försiktigt medan du tillsätter destillerat vatten tills det är skiktat. De flesta av acetonet och de vattenlösliga föroreningarna i vattenskiktet kasseras, vilket bara lämnar petroleumeterlösning.
(4) Efter att petroleumeterlösningen har renats igen med destillerat vatten, rengörs den mer än 5 gånger med 200 ml 80 procent metanollösning innehållande petroleumeter och 0,01 g oxalsyra, och slutligen erhålls en gulgrön suspension .
(5) Torka suspensionen med vattenfritt natriumsulfat och infiltrera den i en kolonn gjord av 3 cm tjockt sackarospulver. Rengör sedan de utfällda pigmenten för att ta bort karotenoider och få dem att bara innehålla naturligt klorofyll.
(6) Sackaroskolonn som innehåller naturligt klorofyll är uppdelad i två skikt, det gröna skiktet har 4-10mm klorofyll B-skikt, det andra blåa skiktet är 2-6mm klorofyll A-skikt.
(7) Den del som ligger i mitten av det blå skiktet (ungefär hälften av det blå skiktet) läggs i eter, suspensionen filtreras och extraheras, rengörs med destillerat vatten, torkas med natriumsulfat och filtreras med redskap för att erhålla klorofyll A.
(8) Ta bort den mellersta delen av det gröna lagret i (6) och lägg det snabbt i etern för filtrering och tvättning för att göra klorofyll B-eterlösning.
Hur separeras under extraktion?
Kromatografi är en viktig metod för separation, rening och identifiering av organiska föreningar, speciellt inom mikroanalys används flitigt. Pigment i frukt och grönsaker inkluderar främst fettlösligt karoten, lutein, klorofyll och vattenlösligt antocyanin. I extraktionsexperiment kan vi använda principen om liknande blandbarhet vattenlöslig antocyaninfiltrering, som i sin tur kan utnyttja tunnskiktskromatografi, kolonnkromatografi, högpresterande vätskekromatografi (HPLC) till separation av betakaroten, lutein och klorofyll, försvagat på grund av polariteten hos de tre typerna av pigment i sin tur, kan lämpligen väljas enstaka organiskt lösningsmedel eller olika förhållande av blandat lösningsmedel som expansionsmedel och elueringsmedel. De optimala separationsbetingelserna bestämdes.
